T 细胞体外分选和扩增

激活 T 细胞的信号通路

T淋巴细胞活化是免疫应答的基础，作为免疫应答起始的T淋巴细胞活化主要由双信号控制。第一信号为特异性抗原识别信号，由抗原呈递细胞APC表面的MHC-抗原肽复合物和TCR-CD3复合物结合形成MHC-TCR-CD3复合体后传导信号到胞内，介导下游信号通路的激活，比如钙调蛋白、MAPK、NF-κB等信号通路的激活。这些信号通路协同作用引起T细胞增殖、迁移、细胞因子生产和效应功能等，使T细胞由静止状态转为增殖和活化状态（图1 右）^[1]。

T淋巴细胞活化所需要的第二信号则是共刺激信号，CD28是T细胞上关键的共刺激信号受体之一，为T细胞提供增强MHC-TCR的主激活信号的主要辅助信号。CD28的配体是CD80 （B7 / BB1或B7-1）和CD86（B7-2），与CD28结合后共同刺激已经被TCR-CD3复合体传递的信号激活的T细胞，使其增殖并分泌相关的白细胞介素IL-2，IL-4和IL-10等细胞因子并上调Bcl-xL的表达，Bcl-xL是一种防止细胞凋亡的蛋白质^[2]。通过与CD3信号协同作用可以显著增强T细胞的扩增与活化。

T 细胞的体外激活（activation）与扩增（expansion）需要持续和充分的活化，通过逆转录病毒载体转导CAR cDNA也需要T细胞活化来转录与翻译。如上所述T细胞活化需要通过T细胞受体（TCR-CD3）的主要特异性信号（信号1）和共刺激信号（如CD28，4-1BB或OX40（信号2）共同作用^[3]。以活化方式来区分，可分为基于细胞的T细胞活化和基于抗体的T细胞活化。

基于细胞的T细胞活化需要抗原呈递细胞如树突状细胞（DC）或人工抗原呈递细胞（AAPCs），但DC细胞的稳定性因人而异，进行AAPCs的生产和选择需要额外的资源。而抗CD3/CD28单克隆抗体通过靶向CD3/CD28分子胞外结构起到激活T细胞的作用，因此可以利用抗CD3的抗体提供第一信号，抗CD28抗体提供共刺激信号，来活化和扩增T细胞。目前体外T-细胞的激活与扩增的主流选择还是基于相关刺激信号分子的抗体（抗CD3/28抗体或抗CD3/28抗体包被磁珠）进行T细胞活化（图2 ）^[4]。

AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28(Cat.No. AC68969)是均匀的聚苯乙/烯球形珠子，已被制成可磁化和超顺磁性，这意味着它们仅在磁场中具有磁性。由于这种特性，当磁场被移除时，磁珠可以很容易地重新悬浮。例如，将靶标特异性抗体附着到磁珠表面，可以直接从复杂的悬浮液（如血液）中捕获和分离完整的细胞。这一切都可以在简单磁场的影响下完成的，而无需离心或色谱柱分离技术。通常，涂有特异性抗体的磁珠可用于分离或去除各种细胞类型。可以根据起始样品的性质、细胞表面标志物和相关下游应用进行阳性或阴性细胞分离。此外，通过将磁珠与针对细胞表面活化分子的抗体偶联，磁珠还可用于细胞的分离和扩增。AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28磁珠偶联anti-human CD3 和 anti-human CD28 抗体，可以进行T细胞的分选、富集和活化，非常实用。

图3.AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 (Cat. No. AC68969) 分选和激活T细胞示意图

我们生产的AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 (Cat.No.AC68969)具有非常优秀性能，能极大地简化离体T细胞分选活化过程。使用AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 (磁珠:细胞比例为3:1)分离并激活来自健康供体的PBMC的CD3⁺T细胞，分选效率非常高。

图4. AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 （货号# AC68969）从PBMCs中分选CD3⁺ T细胞分选效率

图5.使用AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 （货号# AC68969）活化纯化的人CD3⁺T细胞培养48小时。使用anti-human CD25-APC和anti-human CD69-PE对细胞进行荧光染色，并通过流式细胞术进行分析。

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图6. AcnoviaBeads human T-Acivator CD3/CD28（货号# AC68969）刺激纯化的CD3⁺T细胞，在补充有300IU/mL IL-2的T细胞培养基中细胞增殖(左)和细胞活率效果(右)。