产前/胚胎神经元细胞的培养

（1）每100 ml Neuronal培养基添加2 ml B-27添加剂（50X），并加入终浓度0.5 mM的L-谷氨酰胺（Glutamine）或L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液；或者每100 ml Neuronal培养基添加1 ml N-2添加剂（100X），并加入终浓度0.5~2 mM的L-谷氨酰胺或L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液

（2）原代神经元细胞首次接种平板时，应先加入25 µM（3.7 μg/ml）L-谷氨酸。有些细胞系需要加入终浓度2%的血清促进细胞贴壁

（3）可加入25 µM β-巯基乙醇以延长海马神经元的存活时间

注意：培养基准备完全后，请避光保存在2~8 ℃的环境里，并于一周内使用完毕。

细胞培养的条件

培养基：Neuronal培养基细胞类型：贴壁细胞；培养容器和设备：培养板，培养瓶和CO2恒温培养箱；培养温度：36~38 ℃；培养条件：CO2含量5%的湿润空气，避光。实验前应对细胞培养仪器进行温度和空气的设置。

以下实验方案，均以6孔培养板为例。

神经细胞培养

原代神经元细胞的培养在神经生物学和药理学中都是必不可少的。科学家钟爱使用新分离的神经元细胞，因为它们保留着良好的功能性，但是考虑到获取不便，使用商品化的大鼠原代神经元细胞更具有灵活性，能够立即使用，同时其功能性等同于新分离的神经元细胞。而特定原代神经元细胞类型的获取，非常依赖操作者优化的实验方案。

培养板培养细胞

在48孔培养板或者其它培养器皿上包被冷的多聚D-赖氨酸溶液(0.05 mg/ml)。用于原代神经元细胞培养时，包被量0.15 ml/cm2，室温下1小时；

移去包被液，并用无菌水冲洗两次（包被液有细胞毒性，请冲洗彻底）；

勿覆盖冲洗后的培养板，保证空中水分完全干燥。干燥后可立刻使用，或者可在4 ℃的干燥环境中保存两周；

接种细胞入培养板，每60~150 μl Neuronal 和添加剂的混和培养基，接入90~320个/mm2的细胞；

放入培养箱培养一小时；

倾斜培养板，将培养基轻轻吸出；

在孔中迅速加入0.4 ml/孔预热的Neuronal 和添加剂的混和培养基；

接种细胞后3~4天，首次更换培养基，以后每隔3天更换一次培养基；

更换时，吸出一半旧培养基，加入等量新培养基。

注意：培养成神经细胞瘤时，接种和替换的培养基中需要含L-谷氨酰胺溶液。

复苏：

低温储藏复苏后的原代神经元细胞非常脆弱，请勿离心收集细胞！神经元细胞可以附着在塑料或者玻璃表面。为了更好地复苏细胞，我们推荐在使用之前，请用培养基预冲洗所有塑料和玻璃表面。

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• 实验前请准备好多聚D-赖氨酸溶液包被的无菌培养器皿；
• 在37 ℃水浴中，迅速（<1分钟）溶解一小管冻存的细胞。最后一丝冰融化时，立刻从水浴中移出管子；
• 在完全培养基中冲洗移液器尖端，然后轻轻的吸取小管中溶解的细胞，并转移至预先用培养基冲洗过的15 ml圆锥管中；
• 用1 ml预热的培养基冲洗小管，然后用每秒钟2滴的速度滴到15 ml圆锥管中，每滴后轻摇混匀；
• 逐滴加入2 ml培养基，每滴后轻摇混匀，使管内悬液体积达到4 ml；
• 细胞计数；
• 在多聚D-赖氨酸溶液包被过48孔板（或者8腔室盖玻片）的每个孔(或者腔室)中加入约1×105个细胞，并用培养基补充终体积至500 μl；
• 放入培养箱培养；
• 接种细胞后每隔3天更换一次培养基；更换时，吸出一半旧培养基，加入等量无L-谷氨酰胺的新培养基。

产品简介：

Neuronal培养基用于出产前/胚胎神经元细胞的培养，使用时需添加KEL Biotech B-27或N-2添加剂。可应用于海马神经元，大脑皮层和大脑其他区域的神经细胞的培养。该培养基可以在不添加胶质细胞饲养层的情况下，短期或长期维持神经细胞的同源群落存活。Neuronal基础培养基不含L-谷氨酰胺（Glutamine）、L-谷氨酸和L-天冬氨酸，必须组合无血清添加剂(例如B-27或N-2添加剂)，或者血清和0.5 mM L-谷氨酰胺，再或者血清和0.5 mM L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液。初次接种平板时，应加入25 µM L-谷氨酸。

注意事项：

本产品使用注射用水配置。

本产品供科学研究和生产使用，用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。

产品参数：

本产品为过滤除菌产品。物理外观：红色澄清液体；内毒素：≤0.25 EU/ml；渗透压：205~245 mOsm/kg·H20；pH值：7.1~7.5；储藏条件：2~8 ℃，避光；运输条件：蓝冰；用途：仅供科研和生产使用