KELBeads Human T-Activator CD3/CD28 产品说明书

产品描述:

 

KELBeads Human T-Activator CD3/CD28（货号：KC1374-001）用于人源T细胞的分离及体外扩增，可应用于CAR-T及其他T细胞培养技术。该产品由粒径为4.5 μm的磁珠构成，磁珠表面共价偶联抗人CD3和抗人CD28抗体，为T细胞的分离与扩增提供简便方法。

 

首先，KELBeads Human T-Activator CD3/CD28可便捷地从外周血单个核细胞（PBMCs）中分离并富集CD3⁺ T细胞。分离后，磁珠表面的抗CD3与抗CD28抗体可同时提供T细胞活化与扩增所需的初级信号和共刺激信号。在细胞扩增过程中，培养体系需额外添加其他细胞因子（如人源IL-2）以实现更高效的活化。经活化的T细胞在10–13天的培养周期内可实现约800倍的扩增。

 

产品信息:

 

项目       参数

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货号       KC1734-001、KC1734-05 

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反应种属   人源

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浓度       1×10⁸ 磁珠/mL

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粒径       4.5 μm

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内毒素     <1 EU/mL

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用途       用于富集T细胞或PBMCs中T细胞的体外活化与扩增

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配方       磷酸盐缓冲液（PBS），含人血清白蛋白（HSA），pH 7.4

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稳定性     24个月

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储存条件   2℃–8℃，禁止冷冻

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  产品规格:

 

货号	产品名称	包装规格	处理能力
KC1734-05	KELBeads Human T-Activator CD3/CD28	10mL	分离用途：可处理3.3x10^8个CD3+ T细胞； 激活用途：可激活1x10^9个富集的CD3+ T细胞。
KC1734-001	KELBeads Human T-Activator CD3/CD28	10mL	分离用途：可处理3.3x10^8个CD3+ T细胞； 激活用途：可激活1x10^9个富集的CD3+ T细胞。

 

所需材料:

 

- 人源T细胞培养基  

- 用于优化扩增的人源细胞因子，如IL-2

 

 操作流程:

一、CD3/CD28 磁珠清洗

1.1 在离心管里重悬磁珠（涡旋超过30秒，或者颠倒混匀5分钟）；

1.2 取CD3/CD28磁珠，细胞计数仪计数，将确定体积的磁珠转移到离心管中；

1.3 加入等体积的PBS缓冲液(含1%HSA)，若磁珠体积低于1mL则加1mL PBS缓冲液(含1%HSA)，进行重悬；

1.4 把离心管放在磁力架上 1分钟，随后弃去上清；

1.5 将离心管从磁力架上转移下来，用相同体积的 PBS 缓冲液(含1%HSA)重悬磁珠（第二步最初体积的磁珠）。

二、磁珠分选CD3+T细胞和T细胞扩增

2.1 取新鲜的PBMC，1000rpm离心10分钟后去上清，将细胞轻柔的重悬于磁珠分选液或者DPBS缓冲液(含1%HSA)中，细胞计数仪计数，并调节细胞密度为2~5×10⁷ cells/mL；（注意：取1×10⁷ PBMC冻存，用于后续的流式检测）

2.2 将磁珠和PBMC按照 3:1 的比例混合，即1×10⁷ PBMC，3×10⁷磁珠；

2.3 将样品置于四维混合仪，室温条件下孵育30分钟至60分钟；

2.4 用无血清培养基或者DPBS 缓冲液(含1%HSA)稀释磁珠和细胞的混合物，来保证磁力架的分选体积。同时将离心管放在磁力架上4~5分钟；

2.5 弃上清，收集磁性吸附的T细胞，取少数细胞，用磁力架去除磁珠，用流式细胞仪检测CD3阳性细胞的比例（同时还需要检测未分选PBMC的CD3阳性细胞比例），剩余的磁珠和T细胞的混合物用含有300 IU/mL IL-2的完全培养基重悬，并调整细胞密度为0.5×10⁶ cells/mL，置于 37℃，5%CO₂培养箱中培养；

2.6在刺激的48h，取少量细胞，用磁力架去除磁珠，通过流式细胞仪检测CD25和CD69，检测磁珠激活效率；

2.7在刺激的第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天用细胞计数仪计数，记录细胞数和细胞活率。当细胞密度超过1.5-2.5×10⁶ cells/mL或培养基变黄时，添加新的培养基将细胞稀释至4 -6×10⁵ cells/mL，扩大培养。

2.8 细胞再激活：在细胞培养超过13天后，若想T细胞持续增殖，可采用新的磁珠，按照磁珠：细胞比例1:1重复刺激。

 

 性能数据

 

图1：CD3⁺ T细胞的磁性分离。PBMCs与KELBeads Human T-Activator CD3/CD28（货号PM883101）按3:1（磁珠:细胞）比例孵育30分钟，通过流式细胞术分析阳性（分离）组分的分离效率。  

 

 

图2：纯化人源CD3⁺ T细胞的活化。使用KELBeads Human T-Activator CD3/CD28（货号PM883101）活化纯化的人源CD3⁺ T细胞48小时，采用APC标记的抗人CD25抗体与PE标记的抗人CD69抗体进行荧光染色，并通过流式细胞术分析。  

 

 

图3：纯化人源CD3⁺ T细胞的扩增。使用KELBeads Human T-Activator CD3/CD28（货号PM883101）刺激纯化的CD3⁺ T细胞，在含300 IU/mL IL-2的T细胞培养基中扩增，活化细胞可持续扩增达13天（A），并保持高细胞活力（B）。